Введение
Одним из наиболее перспективных объектов тепловодного индустриального рыбоводства является африканский клариевый сом (Clarias gariepinus), обладающий высоким генетическим потенциалом роста и развития в условиях интенсивной технологии воспроизводства и выращивания рыбы [1, 2].
В индустриальной аквакультуре используется искусственное воспроизводство африканского клариевого сома в связи со сложными условиями естественного нереста. В настоящее время наиболее распространенным методом получения спермопродукции самцов африканского клариевого сома является посмертная гонадэктомия, что существенно влияет на возможности селекционной работы с данным видом [2, 3]. В современной литературе имеются незначительные данные по применению авторских методик прижизненной частичной гонадэктомии для многократного использования самцов сома обыкновенного (Silurus glanis) в разведении [1, 4–6]. Схожая методика частичного хирургического удаления гонады с целью получения спермы описана для африканского клариаса в нескольких российских и зарубежных исследованиях [7, 8]. Несмотря на успешность метода, авторы отмечают, что у рыб наблюдается период «переболевания» после хирургической операции. Дополнительным фактором, выступающим не в пользу хирургического вмешательства, является его трудозатратность по сравнению с послеубойным извлечением гонад.
Целью настоящей работы является оценка эффективности и безопасности модифицированного способа проведения гонадэктомии у самцов африканского клариевого сома в целях прижизненного получения спермы.
Материалы и методы
Исследования проведены в ФГБОУ ВО «Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К. А. Тимирязева», в учебно-научной лаборатории аквакультуры, а также на кафедрах аквакультуры и пчеловодства и ветеринарной медицины в период март-апрель 2023 г.
Объектами исследования являлись половозрелые самцы африканского клариевого сома (Сlarias gariepinus) в возрасте 1,5 лет массой 2,08 ± 0,07 кг. Рыбы были поделены на 3 группы (контроль, опытная 1, опытная 2), по 5 рыб в каждой группе.
В предоперационном периоде рыбы содержались в 400-литровых аквариумах с принудительной аэрацией и водоочисткой. Температура воды в аквариумах поддерживалась в пределах 26–28 °С. Кормление осуществлялось комбикормом Le Gouessant Sturgeon Grower 1 раз в сутки по поедаемости.
За 2 суток до проведения операции поднимали температуру в аквариумах до 29 °С и прекращали кормление [7].
За 16 ч до проведения хирургического вмешательства проводили гормональную стимуляцию рыб, вводя им Фертагил в дозе 100 мкг/кг внутримышечно, отступив на 1 см вниз от основания спинного плавника и разделяя общий объем препарата поровну на 6 инъекций [9].
Рыб контрольной группы умертвляли путем погружения в глубокий наркоз в растворе MS-222 и декапитации, затем извлекали правый семенник.
Рыб 1-й и 2-й опытных групп оперировали. Операцию рыбам 1-й опытной группы проводили в соответствии с методикой, предложенной Г. И. Прониной и соавторами [10]. Во время операции удаляли правую гонаду.
Рыбам 2-й опытной группы проводили хирургическое вмешательство, используя парасагиттальный хирургический доступ, открывая его по анатомическим ориентирам, для этого нащупывали костный пояс тазовых плавников и открывали доступ, отступая 0,3–0,5 см дорсально и 0,5–1 см краниально, доступ продлевали краниально на
3–3,5 см. В остальном методика проведения оперативного вмешательства соответствовала таковой для 1-й опытной группы. Во время операции удаляли правую гонаду.
В качестве анестетика использовали гвоздичное масло в дозе 0,2 мл/л воды. Анестезию проводили непосредственно перед операцией в емкостях объемом 5 л по общепринятой методике [4].
Извлечение спермы из семенника проводили общепринятым способом [11].
Оценивали качество спермы по следующим показателям: органолептические свойства, концентрация спермиев в 1 мл спермы, время подвижности спермиев (50 % подвижности и наступление полной неподвижности), доля живых спермиев. Концентрация спермиев определялась с помощью спектрофотометра. Подвижность оценивали микроскопически, соединяя на предметном стекле каплю воды и каплю спермы для активации спермиев, временем начала отсчета считали момент соединения капель. Долю живых спермиев оценивали микроскопически в мазках, окрашенных 5 %-м водным раствором эозина [12].
Рыб в послеоперационном периоде рассаживали индивидуально в емкости объемом 100 л, объединенные в единую установку замкнутого водообеспечения, и устанавливали за ними наблюдение: в течение недели после операции – ежедневно 3 раза в день, затем на протяжении 2 недель – ежедневно 1 раз в день. Во время наблюдения оценивали скорость заживления швов, а также наступление неблагоприятных последствий в послеоперационном периоде.
Статистическую обработку проводили с применением t-критерия Стьюдента для нормального распределения с использованием программы Microsoft Office Excel. Достоверными считались различия при p < 0,05.
Результаты исследований
Непосредственно перед проведением хирургического вмешательства был проведен клинический осмотр рыб контрольной и обеих опытных групп, по результатам которого не было выявлено каких-либо отклонений в состоянии здоровья рыб, что позволяет заключить, что к моменту проведения хирургического вмешательства все рыбы были клинически здоровы. Данные о результатах хирургического вмешательства представлены в таблице.
Результаты проведения хирургического вмешательства по извлечению гонады
The results of surgical intervention to extract the gonad
|
Показатель |
Группа |
||
|
Контрольная |
Опытная 1 |
Опытная 2 |
|
|
Число особей, гол. |
5 |
||
|
Живая масса, г |
2 111 ± 78 |
2 101 ± 74 |
2 030 ± 52 |
|
Время проведения операции, с |
404 ± 15* |
1 618 ± 36 * |
1 235 ± 71* |
|
Масса удаленной гонады, г |
8,76 ± 0,53 |
9,04 ± 0,46 |
8,63 ± 0,40 |
|
Выжило к концу операции: |
|
|
|
|
гол. |
0 |
5 |
5 |
|
% |
0 |
100 |
100 |
|
Выжило в течение 2 мес после операции: |
|
|
|
|
гол. |
0 |
5 |
5 |
|
% |
0 |
100 |
100 |
|
Срок заживления кожного шва, сут |
– |
18 ± 1 |
19 ± 1 |
* Различия между группами достоверны при p < 0,05.
Достоверные различия в массе удаленной гонады между группами отсутствуют (см. табл.), что говорит об отсутствии влияния препарата для наркоза и иных переменных факторов на семенник. Качество спермы, полученной от рыб контрольной, 1 и 2 опытных групп, по исследованным показателям не имело достоверных различий. Во всех пробах содержалось незначительное количество крови, попадающей в сперму (рис.).
a б
Сперма, полученная от самцов африканского клариевого сома классическим методом измельчения семенника:
a – 1 опытная группа; б – 2 опытная группа
Sperm obtained from males of the African catfish by the classical method of crushing the testis:
a – 1 experimental group; б – 2 experimental group
Объем полученной из семенников спермы составлял от 10,3 до 13,2 мл с концентрацией спермиев в среднем (116,13 ± 3,61) · 106 мл–1. Доля жизнеспособных спермиев во всех пробах превышала 75 %, что говорит о хорошем качестве полученной спермопродукции.
Достоверные различия наблюдались во времени проведения вмешательства. Достоверно наиболее быстрым способом получения гонады являлся посмертный, достоверно наиболее долгим – извлечение гонады через срединный разрез брюха.
Уменьшение продолжительности вмешательства при использовании парасагиттального доступа в сравнении со срединным доступом объясняется приближением угла оперативного доступа, состоящего из угла наклона оси операционного действия и угла наклона оси наблюдения, к 90°. Применение парасагиттального доступа позволяло лучше визуализировать оперируемый орган, т. к. зона доступа оказывалась над ним. При организации доступа по срединной линии приходилось вначале отодвигать внутренние органы и лишь затем, при помощи рук, выводить в операционную рану семенник.
Достоверные различия в скорости заживления хирургических швов между 1 и 2 опытными группами отмечены не были. Воспалительный процесс при заживлении кожного шва проявлялся с умеренной силой, не переходя в гиперэргическое воспаление. Никаких побочных явлений, таких как нагноение шва, развитие перитонита и т. д., не отмечалось. Рыбы в течение срока восстановления после операции и дальнейшего заживления шва чувствовали себя удовлетворительно, начинали питаться на 2–3 день после хирургического вмешательства.
Таким образом, использование парасагиттального доступа позволяет сократить время хирургического вмешательства по извлечению гонады африканского клариевого сома с 27 до 20,5 мин без иных существенных различий, что благоприятно отражается на общей скорости работы и позволяет обработать большее количество рыб за смену. Наряду с безопасностью погружения рыб в наркоз с помощью гвоздичного масла на длительный срок, показанной в 1 опыте, это позволяет ставить прижизненное получение гонад «на поток».
Заключение
Таким образом, для получения спермы самцов клариевого сома для искусственного воспроизводства целесообразно применять технику гонадэктомии с открытием парасагиттального операционного доступа. Использование парасагиттального доступа позволяет сократить трудозатраты на проведение хирургического вмешательства и осуществлять гонадэктомию у 1 рыбы в среднем за 20,6 ± 1,2 мин.
