ВведениеАквакультура осетровых начинала развиваться как способ удовлетворения растущего спроса населения на икру и мясо, а также для уменьшения нагрузки на чрезмерно эксплуатируемые дикие ресурсы. С 1997 г. все виды осетровых были добавлены в приложения СИТЕС (Конвенция о международной торговле видами, находящимися под угрозой исчезновения) для защиты популяций от вымирания [1]. Это определило окончательный переход от диких осетровых к выращиваемым на фермах для производства товарной продукции во многих странах. Одним из краеугольных камней обеспечения рыб подходящей средой для роста при сохранении их в хорошем состоянии с высокими показателями выживаемости является обеспечение надлежащего качества корма. Надлежащее качество корма гарантирует не только высокие темпы роста, но и более высокую выживаемость рыбы [2].Помимо того, что в аквакультуре корма должны полностью удовлетворять физиологическим потребностям выращиваемых рыб, не менее важна и экономическая выгода, т. к. затраты на кормление рыб в рыбоводстве весьма масштабны. Считается, что рыбная мука больше не способна поддерживать развитие индустрии аквакультуры в ближайшие годы. В связи с этим становится актуальным поиск альтернативных источников белка для устойчивого производства комбикормовой промышленности. Источники белка животного происхождения, такие как мука из насекомых, могут использоваться в качестве альтернативных источников рыбной муки в кормах для объектов аквакультуры. В последние годы резко возрос интерес к изучению муки из насекомых в рыбоводстве как возможной альтернативы корму. Мука из насекомых – хороший источник белка, минералов и витаминов, аналогичный белку рыбной муки. Она также богата незаменимыми аминокислотами, особенно лизином, метионином и лейцином. Среди насекомых личинки мухи черной львинки особенно перспективны из-за их способности превращать пищевые отходы в белок высшего сорта [3]. Мука из личинки содержит около 30–58 % белка, 10–30 % липидов, незаменимые аминокислоты, макро- и микроэлементы, а также ценные витамины. Соотношение фракций белков в сыворотке крови рыб является индикатором оценки физиолого-биохимического состояния рыб. Изменение состава и соотношения компонентов сыворотки крови приводит к нарушению гомеостаза, снижению иммунного ответа организма на воздействие внешней среды, болезням и является наиболее ранним ответом функциональных систем на неблагоприятные условия среды содержания рыб [4]. Таким образом, целью данной работы явилась оценка частичной замены рыбной муки на сухую биомассу личинок мухи черной львинки по белковым показателям крови особей стерляди – количеству общего сывороточного белка, соотношению белковых  фракций  и белковому коэффициенту.  Материалы и методыВ качестве объектов исследования использовали годовиков стерляди (Acipenser ruthenus), содержащихся в условиях аквакультуры. 40 рыб (большая выборка n > 30, согласно Г. Ф. Лакину [5]) средней массой 145 ± 15,7 г были индивидуально взвешены с точностью до 0,1 г и помещены на выращивание в стеклопластиковые бассейны размером 1,1 × 1,1 м в 2 группах (контроль и опыт). Контрольный и опытный рационы готовили методом влажного прессования [6]. Кормосмесь при производстве кормовых гранул перемешивали и добавляли в нее воду для получения крутого теста. Затем для формирования гранул (2 мм) кормосмесь пропускали через пресс-гранулятор. Полученные влажные гранулы собирали и обезвоживали в сушильном шкафу с горячим воздухом при температуре 50 °C до достижения трехпроцентного содержания влаги, затем помещали в пластиковые пакеты и хранили при температуре 4 °C.Опытный корм готовили с добавкой сухой биомассы личинок мухи черной львинки. Для этого в корме произвели замену рыбной муки в количестве 30 % на биомассу из личинок мухи черной львинки. При выборе процентного соотношения замены рыбной муки полагались на ранее полученные данные об использовании личинок мухи черной львинкив аквакормах для устойчивой аквакультуры [7]. В состав контрольного и опытного рационов входили следующие компоненты: рыбная мука, мясная и мясокостная мука, соевый шрот, пшеничная мука, витазар, килечный жир, кормовые аминокислоты, минерально-витаминный премикс, пробиотическая добавка. Соотношение протеин/жир в готовых кормах составляло 45 / 15. Корма были сбалансированы по аминокислотному и витаминно-минеральному составу. Кормление рыб осуществляли по поедаемости в дневное время с интервалом в 4 ч. Содержание основных питательных веществ контрольного и опытного рационов представленыв табл. 1. Таблица 1Table 1Химический состав контрольного и опытного рационов для годовиков стерлядиChemical composition of control and experimental rations for sterlet yearlingsКормСодержание, %Валовая энергия, МДж/кгсырой протеинсырой жирклетчаткавлагазолаКонтроль45153,0910,819Опыт 15,51119,1  В течение всего периода исследований (30 сут) проверялись параметры качества воды, включая дневные температурные показатели с минимумом 24 °C и максимумом 27 °C (средняя температура составила 26 ± 0,97 °C). Другие измерения варьировались следующим образом: концентрация кислорода 7,9–9,4 мг/л, насыщение 81–99 %.В конце эксперимента, исходя из биометрических измерений, были определены основные показатели роста: абсолютный и среднесуточный прирост массы, коэффициент массонакопления, среднесуточная и удельная скорость роста. Рыбоводно-биологические показатели вычислялись в контрольной и опытной экспериментальных группах по следующим формулам [8–11]:  Абсолютный прирост массы = Wf – Ws;   Среднесуточный прирост массы =   Среднесуточная скорость роста =   Удельная скорость роста = Коэффициент массонакопления =  где Ws и Wf  – масса рыбы в начале и в конце эксперимента; t – продолжительность опыта, сут. У выращенных особей стерляди прижизненным методом отбирались образцы крови. Далее кровь центрифугировали при 1 000 об/мин в течение 10 мин для получения сыворотки крови. В крови определяли количество общего сывороточного белка (ОСБ) биуретовым методом, процентное соотношение белковых фракций методом осаждения нейтральными солями и белковый коэффициент (соотношение количества альбуминов к количеству глобулинов) расчетным методом [12, 13].Экспериментальную часть работ проводили в двойной повторности. Все числовые данные подвергались статистической обработке и представлены в виде среднего и стандартной ошибки среднего, достоверность различий рассчитывали с помощью t-критерия Стьюдента при нормальном распределении данных или с помощью критерия Манна – Уитни при ненормальном (Excel, Microsoft Office 2019, SigmaStat 3.5.).  Результаты и обсуждениеРыбоводно-биологические и гематологические показатели являются адекватным показателем качества и сбалансированности потребляемого корма. Оценка эффективности частичной замены рыбной муки на муку из личинок мухи черной львинки показала, что лучшие показатели роста были отмечены в опытной группе рыб, где абсолютный прирост, среднесуточный прирост, среднесуточная скорость роста и коэффициент накопления массы были выше, чем в контроле (табл. 2, рис.).  Таблица 2 Table 2Рыбоводно-биологические показатели годовиков стерляди, выращенной на контрольном и опытном(частичная замена рыбной муки на муку из личинок мухи черной львинки) рационахFish-breeding and biological indicators of sterlet yearlings grown on the control and experimental(partial replacement of fishmeal with flour from the larvae of black lion flies) rationsПоказательВариант эксперимента КонтрольОпытМасса начальная, г145 ± 15,7Масса конечная, г166,8 ± 24,1169,3 ± 28,9Длина абсолютная начальная, мм29,6 ± 1,8Длина абсолютная конечная, мм34,6 ± 2,335,1 ± 3,4Абсолютный прирост, г21,824,3Среднесуточный прирост, г0,730,81Среднесуточная скорость роста, %0,460,51Удельная скорость роста, %0,200,23Коэффициент массонакопления, ед.0,00720,008Выживаемость, %100Продолжительность опыта, сут30 Прирост массы годовиков стерляди на контрольном и опытном рационах Weight gain of sterlet yearlings on control and experimental diets  Однако данные не являются достоверными, что говорит об эффективности и контрольного, и опытного вариантов корма. Выживаемость стерляди в обоих вариантах составила 100 %. Поскольку эффективность переработки корма прямо пропорциональна интенсивности кормления, можно сказать, что среднесуточная скорость роста в 0,51 % массы телав день в опытном варианте не является верхним пределом для удовлетворения потребностей годовиков стерляди, которые, скорее всего, способны эффективно использовать  дополнительные  объемы  корма с проверенным уровнем белка.Коэффициент достоверности аппроксимации, показывающий степень соответствия трендовой модели исходным данным в контрольном и опытном вариантах, приближался к значению 1 (см. рис.), это говорит о том, что модель точнее описывает имеющиеся данные.Сведения, характеризующие белковый обмен в крови стерляди, полученные в процессе экспериментального кормления, представлены в табл. 3. Таблица 3Table 3Соотношение белковых фракций сывороточного белка крови стерлядиThe ratio of protein fractions of sterlet blood serum proteinПоказательНачалоэкспериментаКонец экспериментаОпытКонтрольОСБ, г/л20,70 ± 1,02А-Б*24,55 ± 2,57А-Б22,05 ± 1,31Альбумины, %39,60 ± 7,32А-Б46,72 ± 7,79А-Б, Б-В42,43 ± 9,30Б-Вα-глобулины, %34,98 ± 6,7924,96 ± 5,6620,47 ± 6,36β-глобулины, %7,74 ± 2,0517,17 ± 0,8917,06 ± 5,11γ-глобулины, %17,68 ± 4,7311,16 ± 0,74Б-В20,04 ± 3,87Б-ВБелковый коэффициент, усл. ед.0,90 ± 0,260,94 ± 0,19Б-В0,88 ± 0,31Б-В * Достоверно статистически значимые различия между: начало эксперимента – А; конец эксперимента, опыт – Б; конец эксперимента, контроль – В (р < 0,05).  Сывороточный белок в крови рыб представляет собой суммарную концентрацию альбуминов и глобулинов. Белки крови выполняют в организме множество важнейших функций: свертывание крови, поддержание постоянства рН крови, осуществление транспорта веществ (перенос жиров, билирубина, стероидных гормонов в ткани и органы), участвуют в иммунных реакциях и т. п. [14]. Уровень ОСБ в крови стерляди в процессе экспериментального кормления увеличился, особенно в опытной группе (достоверно) и соответствовал референсным значениям (см. табл. 3) [15]. Повышение концентрации белка в крови рыб свидетельствует о достаточной питательности корма и способствует увеличению прироста в результате наращивания мышечной массы, а следовательно, и более быстрому росту осетровых рыб [16]. Также высокая концентрация ОСБ является показателем оптимизации обменных процессов и высокой неспецифической резистентности организма осетровых рыб [17].Фракционный состав белков сыворотки крови осетровых рыб высокогетерогенный и содержит от 15 до 21 компонента, которые представлены альбуминами (преальбуминами), α-, α2, β-, γ-глобулинами [18]. В норме, например, у русского осетра доля альбуминов составляет 32 %, α-глобулинов – 28 %, β-глобулинов – 25,5 %, γ-глобулинов – 14,5 % [19]. Как в начале, так и в конце эксперимента наибольшая доля в сывороточном белке стерляди приходилась именно на альбумины, причем достоверно эта доля увеличивалась в опытной группе и стала у них наибольшей в конце периода наблюдения (см. табл. 3). Альбумины отражают субстратную обеспеченность анаболических процессов организма рыбы и напряженность пластического обмена. Показатель доли альбуминов является одним из оценочных критериев адаптационных возможностей и жизнестойкости организма. Они осуществляют транспортную функцию, участвуют в поддержании коллоидно-осмотического давления плазменных белков, что играет ведущую роль в перераспределении воды и солей тканями, влияющими на вязкость крови [15]. Доля альбуминов у осетровых может составлять при средних 25 до 55 % и всегда наибольшая среди других фракций белков [14, 20]. На фоне увеличения доли альбуминов как в опытной, так и в контрольной группе снизилось количество α-глобулинов, в норме вторых по размеру доли сывороточных белков у русского осетра. Альфа-глобулины – это гликопротеиды, т. е. белки, связанные с углеводами. У животных опасным сигналом считается повышение их доли [21]. Уровень β-глобулинов в процессе экспериментального кормления с патологичного минимального увеличился и стал почти таковым как в норме, например у русского осетра, третьим по количеству в опытной группе, тогда как в контрольной он по-прежнему был минимальным (см. табл. 3). Бета-глобулины – это липопротеины. В их состав входят фосфолипиды и холестерин. К этой белковой фракции относится белок трансферрин, обеспечивающий транспорт железа [22]. Количество γ-глобулинов в опытной группе снизилось, а в контрольной увеличилось и стало достоверно выше в 2 раза, чем в крови рыб, получавших корм с добавкой биомассы черной львинки (см. табл. 3). Для γ-глобулиновой фракции характерна наименьшая концентрация, напримеру русского осетра в норме, по литературным данным, 5,4–14,5 % [16, 19]. Эта фракция белков состоит из иммуноглобулинов, функционально представляющих собой антитела, которые обеспечивают иммунную защиту организма от инфекций и чужеродных веществ. Повышение уровня γ-глобулинов свидетельствует о напряжении защитно-приспособи-тельных сил организма [22]. Белковый коэффициент на протяжении всего эксперимента у особей стерляди был в норме, но минимальный уровень был отмечен для контрольной группы. Снижение этого коэффициента может быть связано с ухудшением питания, патологиями работы печени, снижением иммунитета и пр.Таким образом, эксперимент по использованию добавки в корм для осетровых рыб биомассы личинок мухи черная львинка показал ее положительное влияние на белковый обмен их организма. Количество сывороточного белка, как и доля фракции альбумина в крови у рыб из опытной группы, выросли и были выше, чем у рыб из контрольной, что свидетельствует о полноценном использовании белковой составляющей испытуемого корма. Фракционный состав сывороточного белка у стерляди из опытной группы был близок к норме, характерной для осетровых, тогда как у рыб из контрольной группы наблюдали повышенный уровень γ-глобулинов и снижение белкового коэффициента, что может свидетельствовать о напряжении иммунитета организма, в отличие от рыб из опытной группы, где доля этой фракции была в пределах нормы.  ЗаключениеОсновная цель текущего эксперимента заключалась в установлении эффективности использования в кормах для годовиков стерляди сухой биомассы из личинок мухи черной львинки в качестве альтернативного источника белка. Полученные экспериментальные данные имеют особую практическую ценность, поскольку позволяют рекомендовать частичную замену рыбной муки (30 %)в кормах для стерляди с целью повышения иммунного статуса выращиваемых рыб. В результате проведенных исследований был получен положительный опыт. Уровень общего сывороточного белка, его фракционный состав у стерляди из опытной группы был близок к норме, характерной для осетровых, тогда как у рыб из контрольной группы наблюдали повышенный уровень γ-гло-булинов и снижение белкового коэффициента, что может свидетельствовать о напряжении защитно-приспособительных сил организма, в отличие от рыб из опытной группы, где доля этой фракции была в пределах нормы.