Введение Одной из важнейших мировых проблем является вопрос о загрязнении территорий рыбного и сельскохозяйственного промысла различного рода токсическими веществами. Согласно статистике количество объектов антропогенного влияния увеличивается ежегодно, а нарушение эколо-гического баланса, возникающего в результате подобного воздействия, сказывается, прежде всего, на флоре и фауне водоемов. Идея об утилизации отходов закапыванием, сжиганием или созданием кластерных хранилищ имела широкое распространение в советском пространстве. Токсичные стоки фармацевтических и пищевых производств, радиоактивные отходы, отходы сельскохозяйственной деятельности – все это утилизируется согласно правилам, прописанным десятки лет назад. На сегодняшний день массовые скопления токсических веществ наиболее часто обнаруживаются в почве. Мигрируя с потоками талых и почвенных вод, яды распространяются на обширные расстояния, аккумулируясь, как правило, в водоемах. Природным фильтром любого водоема являются донные отложения, основная роль которых заключается в обеспечении питания обитающих в нем гидробионтов. Массовые скопления в донных отложениях тяжелых металлов приводят к сильнейшим изменениям в организмах всех представителей флоры и фауны водного биоценоза, что ставит под вопрос целесообразность их пищевого использования [1].Все гидробионты водной среды состоят друг с другом в очень тесных многоуровневых отношениях. Только организм рыбы служит местом обитания колоссального количества бактерий: вирусов, простейших, а также гельминтов. Последние оказываются наиболее подверженными общему воздействию как различных абиотических факторов, так и физиолого-биохимического воздействия хозяина. Необходимость в постоянном развитии и расширении приспособительных структур приводит либо к расширению жизненного цикла гельминта, либо к изменениям в его биологии. Кроме того, под действием токсических веществ значительно снижается резистентность организма рыбы, что делает ее более подверженной воздействию инфекционных и инвазионных возбудителей, что в дальнейшем будет характеризовать общую экологическую ситуацию в водоеме [2].В связи с этим проведение исследований в области санитарной микробиологии и постоянный мониторинг за состоянием водных биологических ресурсов являются ведущими направлениями современной науки. Для проведения подобного рода исследований зачастую ученые выбирают не только наиболее многочисленные объекты, но и максимально показательные с точки зрения оценки качества водной среды. Такими объектами, как правило, являются бентосоядные организмы – это, преимущественно, донные рыбы, питающиеся представителями макробентоса на дне водоемов. В Волго-Каспийском регионе бентосоядные рыбы представлены семейством карповых. Так, лещ Abramis brama (L., 1758) остается наиболее многочисленным объектом промысла в Астраханском регионе. Его биология достаточно изучена, что позволяет с большой степенью вероятности связывать изменения в его организме с нарушениями в среде водоема. Санитарно-эпизоотологические исследования, проводимые в дельте Волги, не теряют своей актуальности многие десятилетия, приобретая практическую значимость в связи с развитием рыночной экономики России. Актуальность данного исследования определяется необходимостью регулярного проведения санитарно-гигиенического мониторинга водных биологических ресурсов естественных водоемов в регионах с неблагополучной экологической обстановкой.Цель настоящей работы заключалась в оценке состояния водных биологических ресурсов при микробной инвазии на примере леща Abramis brama (L., 1758) рыбопромыслового района Волго-Каспийского канала.Материал и методы исследованийОбъектами исследований служили половозрелые особи леща Abrams brama (Linnaeus, 1758). Сбор материала осуществлялся во время специализированных рейсов в дельту реки Волги в 2020–2021 гг. Количественные и качественные показатели микрофлоры леща оценивались на основании анализа 180 особей. Показатели микрофлоры воды анализировались по результатам исследований 90 образцов. Видовую идентификацию выделенной микрофлоры проводили по определителям Берджи [3].Оценку качества водных биологических ресурсов по микробиологическим показателям проводили в соответствии с требованиями, предъявляемыми нормативными документами, действующими на территории Российской Федерации [4].Показатель количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) свидетельствует об общей микробной обсемененности исследуемого объекта. Микроорганизмы культивируются на мясопептонном питательном агаре (МПА) при температуре +30–37 °С в течение 48–72 ч [5].Результаты исследования присутствия в мышечной ткани рыб колиформных бактерий используются в качестве показателя обширного фекального загрязнения водоема при значительном поражении иммунной системы рыб. Бактерии группы кишечных палочек (БГКП) относятся к грамотрицательным тонким, прямым и слегка изогнутым палочкам. Имеют металлический блеск и оксидаза-отрицательный тест [6].К группе условно-патогенных микроорганизмов относится представитель Staphylococcus aureus, имеющий вид шаровидных грамположительных бактерий из рода Staphylococcaceae. В окрашенном препарате их дифференцируют по характерному расположению кокков в форме виноградной грозди [7].Патогенные бактерии рода Salmonella всегда грамотрицательные, неспорообразующие подвижные палочки. Факультативные анаэробы, они способны сбраживать некоторые углеводы и спирты с образованием кислоты и газа [8].Бактерии рода Listeria – грамположительные тонкие и короткие палочки, микроорганизмы, образующие характерные колонии на плотных селективных средах и идентифицируемые по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам. Колонии растут в виде сине-зеленых образований, окруженных специфическим непрозрачным ореолом [9].Условно патогенными микроорганизмами являются и парагемолитические вибрионы – это галофильные организмы семейства Vibrionaceae, диагностируемые на элективных средах СЭДХ, TCBS и ДДА, где вырастают в виде круглых прозрачных колоний с блестящей поверхностью, диаметром 2-3 мм. Цвет колоний, как правило, совпадает с цветом селективной среды, т. к. в данном случае микроорганизмы пигмента не об-разуют и среду не сбраживают. Однако на средах Ресселя и Клиглера рост микроорганизмов отмечают именно по характерным изменениям цвета [10].Микробиологический анализ воды проводился согласно действующей нормативно-правовой документации [11].Контаминация мышечной ткани рыб является нормируемым микробиологическим критерием, необходимым для санитарно-гигиенической оценки рыбного сырья, и оценивается согласно нормативным документам [12] (табл. 1). Таблица 1Table 1Микробиологические показатели СанПиН 2.3.2.1078-01, предъявляемые к рыбе-сырцуMicrobiological indicators of SanPiN 2.3.2.1078-01 for fish raw materialsИндекс, группа продуктовКМАФАнМ, тыс. КОЕ/гМасса продукта, г, в которой не допускаютсяV. parahaemolyticus,тыс. КОЕ/гБГКПпатогенные, в том числе Salmonella и L. monocytogenesSt. aureusРыба-сырец и рыба живаяНе более 5 ∙ 1040,01250,010,1 В соответствии с требованиями законов Российской Федерации «О защите прав потребителей» [13] и «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» [14] разработан свод правил, способствующих противодействию передачи заболеваний от гидробионтов к человеку и животным. Результаты исследованийОпределение санитарных показателей мышечной ткани рыб. При заселении биотопа в макроорганизме формируются определенные межбактериальные взаимоотношения, которые качественно и количественно характеризуют тот или иной микробный пейзаж.В тканях рыб отмечается большое содержание воды и соответствующих питательных веществ, что способствуют быстрому размножению в них аэромонад, листерий, вибриофлоры и прочей микрофлоры. В связи с этим изучение вопросов, касающихся условий, которые влияют на формирование бактериоценоза гидробионтов в районе Волго-Каспийского региона, а также факторов патогенности их микрофлоры и санитарно-эпизоотической ситуации, остаются весьма интересными. Отбор образцов для проведения экспериментов по определению общей микробной обсемененности осуществляли через стандартные навески, выполняли разведения в двух повторностях и производили посевы глубинным методом на мясопептонный агар (МПА). Колонии выросших микроорганизмов учитывали через 24 и 48 ч инкубирования. Результаты исследований по определению общей микробной обсемененности и выявлению присутствия патогенной и условно-патогенной микрофлоры представлены в табл. 2. Таблица 2Table 2Средние значения микробиологических показателей качества мышечной ткани леща рыбопромыслового района Волго-Каспийского канала в 2020–2021 г.*Mean values of microbiological indicators of the bream muscle tissue quality in the fishing area of the Volga-Caspian Canal in 2020-2021 (according to SanPiN 2.3.2.1078-01)Норма по СанПиН 2.3.2.10.78-01КМАФАнМ, тыс. КОЕ/гБГКППатогенные, в том числе Salmonella и L. monocytogenesSt. aureusV. parahaemolyticus,тыс. КОЕ/гНе более 5 ∙ 1040,01250,010,1Рыба-сырец1,00 ∙ 103 ± 0,05Не обнаруженоНе обнаруженоНе обнаруженоНе обнаружено*Согласно СанПиН 2.3.2.1078-01. В мышечной ткани обследованных особей леща отмечали различный уровень аэробов и факультативных анаэробов. В среднем их значение составляло 1,00 × 103 ± 0,05 КОЕ/г, что ниже предельно-до-пустимого содержания бактерий в 1 г мышечной ткани сырой рыбы.Патогенной микрофлоры в виде бактерий группы кишечной палочки, бактерий родов Salmonella, L. monocytogenes и St. aureus не выявлено. Ряд микробиологических обследований образцов рыбы не выявил нарушений санитарных показателей, регламентируемых нормативно-правовой документацией. Следовательно, на основании полученных данных можно говорить об удовлетворительном микробиологическом состоянии леща Abramis brama (L., 1758), выловленного в рыбопромысловом районе Волго-Каспийского канала в 2020–2021 гг. Исследования сезонной динамики микробной обсемененности жаберного аппарата и воды Определение общей микробной обсемененности является одним из наиболее важных показателей мониторинга, необходимых для оценки состояния изучаемых водных биологических объектов. Естественная микрофлора живой рыбы, ее качественные и количественные значения напрямую зависят от условий обитания гидробионта, а также от гидрологических характеристик водоема, изменяющихся в различные сезоны года. Так, в работе определялись и сравнивались количественные показатели микробной контаминации жабр рыб и обсемененности воды. Предположительно микробная контаминация жаберного аппарата рыбы должна быть меньше, чем общая микробная обсемененность воды, что объясняется активным иммунным ответом организма на постоянное присутствие различных инфекционных возбудителей. Результаты проведенного в 2020–2021 гг. анализа общей микробной обсемененности жабр леща и воды из мест его вылова в целом свидетельствуют о стабильной микробиологической ситуации (табл. 3). Таблица 3Table 3Сезонная динамика микробной обсемененности жабр леща и воды из мест его вылова в 2020–2021 гг.*Seasonal dynamics of microbial contamination of bream gills and water from the places of its catch in 2020-2021*Жабры, КОЕ/гВода, КОЕ/млвесналетоосеньвесналетоосень1,3 × 103 ± 0,053,0 × 104 ± 0,052,0 × 103 ± 0,052,4 × 103 ± 0,053,6 × 104 ± 0,052,8 × 103 ± 0,05*P ≥ 0,05. Выявленные количественные различия этих показателей могут быть обусловлены дополнительными антропогенными влияниями и соответствующим иммунным ответом организма рыбы (рис. 1). Рис. 1. Средние значения микробной обсемененности жаберного аппарата леща и воды из мест его вылова в 2020–2021 гг. (p ≥ 0,05) Fig. 1. Mean values of microbial contamination of the bream gill apparatus and water from the places of its catch in 2020–2021 (p ≥ 0.05) Отмечена определенная зависимость представленных значений от исследуемых сезонов года: летом, в связи с сезонным повышением температур, регистрируется увеличение значений микробной обсемененности исследуемых образцов, что свидетельствует об относительной стабильности бактериальных систем жаберного аппарата леща. Анализ состава микрофлоры воды Волго-Каспийского рыбопромыслового канала. Микроорганизмы как наиболее многочисленные обитатели гидроэкосистемы обладают различными метаболическими возможностями адаптации к широкому спектру условий окружающей среды, а также высокой устойчивостью к экстремальным факторам, в том числе антропогенным. Анализы качественного состава микрофлоры, выделенной из проб воды дельты Волги за периоды исследований, показали наличие широкого разнообразия в ее биотопах. Спектр условно-патогенных бактерий был представлен следующими видами: сем. Enterobacteriaceae: родами – Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Salmonella; в сем. Vibrionaceae отдифференцировано шесть видов только рода Aeromonas; в сем. Pseudomonodaceae – бактерии рода Pseudomonas; в сем. Neisseriaceae – виды родов Acinetobacter и Moraxella; в сем. Bacillaceae – Bacillus spp.Вся выделенная микрофлора, согласно определенным процентным соотношениям, распределена по семействам (рис. 2). Рис. 2. Процентное соотношение микрофлоры, выделенной из обследованных образцов воды рыбопромыслового района Волго-Каспийского канала в 2020–2021 гг. (р ≤ 0,05)Fig. 2. The percentage of microflora taken from the surveyed water samples of the fishing area of the Volga-Caspian Canal in 2020–2021 (p ≤ 0.05) Предположительно, дифференцированные бактерии родов Alcaligenes, Flavobacterium и остальные грамположительные микроорганизмы, обнаруженные в воде, являются естественной микрофлорой водоемов Астраханской области, однако способны поражать паренхиматозные органы рыб не только при снижении резистентности организма, но и при высоком уровне контаминации, что может привести к гибели инфицированных особей.ЗаключениеРыбная продукция является одним из основных источников питательных веществ для человека и животных. Широкий спектр продукции, выпускаемой рыбными хозяйствами, обеспечивает потребителя необходимыми микро- и макроэлементами, белками, жирами, углеводами и различными нутриентами. Рыбное хозяйство постоянно развивается и набирает обороты несмотря на то, что продукция из гидробионтов является наиболее скоропортящейся. В связи с повышенной микробной обсемененностью она теряет в необходимых показателях качества в течение 12–24-х часов. Рыбная продукция допускается в реализацию только в том случае, если она по результатам всех лабораторных исследований была признана доброкачественной и пригодной для употребления в пищу. По результатам проведенных микробиологических исследований можно сказать, что в среднем показатель КМАФАнМ мышечной ткани исследованных особей леща составлял 1,00 ∙ 103 ± 0,05 КОЕ/г, что ниже предельно допустимого содержания бактерий в 1 г мышечной ткани сырой рыбы согласно СанПиН 2.3.2.1078-01. Патогенной микрофлоры в виде бактерий группы кишечной палочки, бактерий родов Salmonella, L. monocytogenes и St. aureus не обнаружено. Обсемененность жабр в среднем составляла 2,1 ∙ 103 ±± 0,04 КОЕ/г, тогда как среднее значение микроб-ной численности в образцах воды превышало последнее в 0,8 раз, что может быть обусловлено активными иммунными реакциями организма.