ВведениеТемпы развития аквакультуры в последнее время снизились из-за дефицита основных источников белка и липидов (рыбной муки и рыбьего жира) в рационах рыб. Замена белка рыбной муки на полноценный протеин путем подбора растительных и животных компонентов оказалась менее сложной задачей, чем замена рыбьего жира. Растительные масла, применяемые как заменители рыбьего жира, легко, как и рыбий жир, метаболизируются и используются в качестве энергии в организме рыб, не оказывая негативного влияния на рост, выживаемость, на аминокислотный, минеральный, витаминный составы их тканей [1–4]. Проблема заключается в жирнокислотном составе липидов. Липиды рыб богаты длинноцепочечными полиненасыщенными жирными кислотами (ПНЖК) семейства омега-3: ДГК (22 : 6n3) и ЭПК (20 : 5n3), которые играют ключевую роль в физиологии животных, но отсутствуют в липидах наземных растений. Некоторые виды растений содержат лишь незаменимую альфа-линоленовую кислоту (АЛК 18 : 3n3), которую пресноводные рыбы, обладающие соответствующими ферментами (десатуразами и элонгазами), могут трансформировать в ДГК и ЭПК [5–8], ноне всегда в достаточном количестве. У морских рыб такая способность утрачена или развита очень слабо, т. к. они обеспечивают свою потребность в необходимых жирных кислотах (ЖК) из естественной пищи, богатой ПНЖК омега-3, в том числе длинноцепочечными формами. Их рацион в аквакультуре должен содержать нужное количество ПНЖК. Таким образом, основным лимитирующим фактором при разработке полноценных кормов для аквакультуры является рыбий жир.Несмотря на значительный объем исследований по замене рыбьего жира на другие источники липидов в диетах рыб, этот вопрос еще мало разработан с учетом видовых, возрастных, репродуктивных, экологических особенностей как морских, так и пресноводных рыб, с учетом количества и состава ЖК в используемых липидах.В настоящей работе представлены исследования по включению в состав кормов двухлеток сиговых в качестве заменителей рыбьего жира различных растительных масел, содержащих АЛК. Кроме того, излагаются результаты замены части рыбьего жира желтком куриного яйца – источника арахидоновой кислоты (АРК 20 : 4n6). Дефицит АРК – известная проблема аквакультуры [9–12].Материалы и методыИспытания с двухлетками муксуна (Coregonus muksun) проводили в рыбхозе ООО «Форват» в садках, установленных в оз. Суходольское Вуоксинской озерно-речной системы (Ленинградская обл.). В качестве заменителей рыбьего жира использовали льняное, рапсовое, соевое и рыжиковое масла, которые содержат АЛК: льняное масло в количестве 35–65 % от суммы кислот, соевое – 6,8 %, рапсовое – 7–12 % [2, 13], рыжиковое – 36,7–37,7 % [14]. Куриный желток был выбран в качестве источника АРК. Для оценки эффективности использования в аквакультуре разрабатываемых отечественных кормов проводили их сравнение с западным коммерческим кормом «Ройял» («Райсиоагро», Финляндия), содержащим, согласно проспекту, 48 % белка и 24 % жира. После прекращения поставки финских кормов (июль-август 2022 г.) использовали белорусский корм производства ЗАО «БНБК», включавший 49–51 % белка и 17–19 % жира.Температурные условия в ходе проведения экспериментов с мая по октябрь были не всегда благоприятны. Температура воды в летнее время иногда превышала допустимый уровень для сиговых – 20 ºС, когда приходилось снижать суточные дозы кормления. Все опыты завершались во второй половине октября (16–23 октября) при температуре 10–16 ºС.Эффективность кормов с разным содержанием растительных масел оценивали по рыбоводно-биологическим и физиологическим показателям. Особое внимание уделяли содержанию ЖК в липидах мышц и печени, в процентах от суммы кислот. Количество ДГК и ЭПК в пересчете на граммы в 100 г мышечной  ткани  определяли  с  учетом жира в мышцах.Анализы жирнокислотного состава липидов выполнены по заказу Санкт-Петербургского филиала Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии (ГосНИОРХ им. Л. С. Берга) в ООО «Аналитика, материалы, технология» методом газожидкостной хроматографии. Содержание жира определяли по Фолчу с двумя растворителями, витамина C – по методу В. И. Бунина в модификации Л. М. Князевой [15], показателей крови (содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу) – общепринятыми методами [16, 17]. Статистическую обработку результатов проводили в программе Microsoft Excel. Результаты и обсуждениеЗамена пятой части рыбьего жира на льняное масло в составе кормов для двухлеток муксуна (опыт 1). Контрольный корм № 1 содержал 20 % рыбьего жира, в корме № 2 пятую часть рыбьего жира (4 %) заменяли на льняное масло. У рыб, выращиваемых на контрольном корме, конечная масса была несколько ниже, чем у муксуна, получавшего финский корм и корм с заменой рыбьего жира на льняное масло (табл. 1), но различия статистически недостоверны, нет существенной разницы и по другим рыбоводно-биологическим показателям.  Таблица 1 Table 1Рыбоводно-биологические показатели двухлеток муксуна, опыт 1Fish-breeding and biological parameters of two-year-old muksun, experiment 1КормЛипиды корма, %Рыбоводно-биологические показателиИндивидуальная масса рыбы, г Выживаемость рыб,%Общаябиомасса, кгСуточныйприрост рыб, %Кормовойкоэффициент№ 1 (контроль)Рыбий жир – 20177,6 ± 5,7271,319,01,31,1№ 2Рыбий жир – 16Льняное масло – 4191,9 ± 5,9778,722,61,40,9РойялНет данных193,4 ± 5,8170,720,51,41,0  Параметры красной и белой крови колебались в пределах референсных значений, т. е. не отклонялись от нормы у рыб, выращиваемых на всех вариантах кормов (табл. 2).  Таблица 2Table 2Показатели красной и белой крови у двухлеток муксуна на разных кормахIndicators of red and white blood in two-year-old muksun on different feedsКормПоказатели кровиГемоглобин, г/лЛимфоциты, %Полиморфно-ядерныелейкоциты, %Моноциты, %Количестволейкоцитов на 500 эритроцитов, шт.Незрелыеэритроциты, %№ 1 (контроль)72,60 ± 1,1290,9 ± 1,083,4 ± 0,485,70 ± 0,7514,10 ± 0,8710,0 ± 0,84№ 270,80 ± 0,9591,70 ± 1,023,60 ± 0,694,70 ± 0,5612,70 ± 1,417,70 ± 0,52Ройял74,40 ± 1,5790,50 ± 2,143,40 ± 0,646,10 ± 1,589,40 ± 1,217,60 ± 0,82Референсные значения70–11080–98––10–255–25  Не наблюдалось существенной разницы и отклонений от нормы в содержании витамина С и общего жира в мышцах и печени двухлеток муксуна, выращиваемых как на экспериментальных, так и на импортных кормах (табл. 3). Таблица 3Table 3Содержание витамина С и общего жира в мышцах и печени двухлеток муксуна, опыт 1The content of vitamin C and total fat in the muscles and liver of two-year-old muksun, experiment 1КормИндекс печени, %Витамин С, мкг/гЖир, %в мышцахв печенив мышцахв печени№ 1 (контроль)1,328,5113,09,85,8№ 21,130,0114,410,85,9Ройял1,236,7115,111,46,7Референсные значения1,1–1,520–10080–1209–133–7  Таким образом, замена пятой части рыбьего жира на льняное масло не вызвала ухудшения роста и физиологического состояния двухлеток муксуна. Не отразилась она и на содержании ПНЖКв мышцах рыб, в том числе и на длинноцепочечных ДГК и ЭПК (табл. 4).  Таблица 4Table 4Жирные кислоты липидов мышц двухлеток муксуна, опыт 1Fatty acids of muscle lipids in two-year-old muksun, experiment 1ПоказательКорм№ 1№ 2РойялЖирные кислоты, % от суммы18 : 1n94,29,97,818 : 2n617,318,944,220 :  4n60,210,130,1818 : 3n35,06,613,520 : 5n36,54,91,722 : 6n317,817,07,2∑ n630,828,147,0∑ ω333,231,323,5n3 / n61,11,10,5ДГК + ЭПК, %24,321,98,9Жирные кислоты, г/100 г мышцДГК + ЭПК2,382,361,01 Существенно меньше ПНЖК было у рыб, питавшихся финским кормом.Пересчет количества длинноцепочечных ПНЖК из процентов в граммы показал, что 100 г муксуна, выращенного на экспериментальных кормах, обеспечивает для человека двойную суточную норму ДГК и ЭПК, установленную Всемирной организацией здравоохранения: 0,5–1,0 г [8]. Замена рыбьего жира на соевое, рапсовое масла и желток куриного яйца в составе кормов для двухлеток муксуна (опыт 2). Контрольный корм № 3 содержал 20 % рыбьего жира. В составе кормов № 4–6 8 % рыбьего жира заменяли на соевое, рапсовое масла или куриный желток. При использовании растительных масел в экспериментальных кормах индивидуальная масса и общая биомасса рыбы была выше, чем в контрольном варианте (табл. 5).  Таблица 5Table 5Рыбоводно-биологические показатели двухлеток муксуна,получавших корма с разными липидами, опыт 2Fish-breeding and biological parameters of two-year-old muksunfed with different lipids feeds, experiment 2КормЛипиды корма, %Рыбоводно-биологические показателиИндивидуальная масса рыбы, гВыживаемость рыб, %Общаябиомасса, кгСуточныйприрост рыбы, %Кормовойкоэффициент№ 3 (контроль)Рыбий жир 20180,0 ± 8,37720,71,31,6№ 4Рыбий жир 12Соевое масло 8208,7 ± 7,27523,61,51,3№ 5Рыбий жир 12Рапсовое масло 8191,8 ± 6,27220,71,41,6№ 6Рыбий жир 12Желток 8171,0 ± 3,79424,11,31,3РойялНет данных203,9 ± 6,59228,11,41,1  Достоверно более высокую среднюю массу, чем в контроле, при уровне значимости Р < 0,05 имели двухлетки на кормах с включением соевого масла (корм № 4). Их рыбоводно-биологические показатели были сходны с показателями рыб, выращенных на финском корме. Выживаемость была практически одинаковой у рыб, получавших корма с рыбьим жиром и с его заменой на растительные масла, но самой высокой была выживаемость у рыб на кормах с желтком (№ 6) и на «Ройял» (94 и 92 % соответственно). Таким образом, замена 8 % рыбьего жира на другие источники липидов (корма № 4–6)не ухудшило рыбоводно-биологических показателей рыб на контрольном варианте, содержащем 20 % рыбьего жира. Физиологическое состояние рыб не всегда отвечало норме, что, вероятно, связано с длительным (в течение 2-х месяцев) периодом высокой температуры воды в ходе опыта 2, превышающей допустимую (20 ºС) для сиговых рыб. В этот период, независимо от состава кормов, содержание витамина С у всех рыб, включая получавших импортный, снизилось в мышцах и печени более чем в 2 раза по сравнению с референсными значениями (табл. 6).Поскольку витамин С является активным антиоксидантом, его расход связан с увеличением процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме рыб при повышенной температуре [18]. Этим можно объяснить и снижение гемоглобина в ряде случаев (до 59–65 вместо 70–110 г/л) и повышенный (до 1,6 %) индекс печени. Об активизации ПОЛ свидетельствует и резкое уменьшение ПНЖК у рыб по сравнению с предыдущим опытом 1, который проходил в основном при благоприятной температуре.  Таблица 6Table 6Физиологические показатели двухлеток муксуна, получавших корма с разными липидамиPhysiological parameters of two-year-old muksun fed with different lipids feedКормГемоглобин,г/лНезрелыеэритроциты, %Индекспечени, %Витамин С, мкг/гЖир, %в мышцахв печенив мышцахв печени№ 372,6 ± 2,587,0 ± 0,761,5 ± 0,069,329,010,96,9№ 459,4 ± 3,5713,2 ± 0,991,6 ± 0,0810,436,611,36,7№ 559,6 ± 5,3419,1 ± 8,051,5 ± 0,089,829,513,16,4№ 680,6 ± 1,169,2 ± 1,241,6 ± 0,0511,729,012,87,0Ройял65,6 ± 7,0322,1 ± 7,651,6 ± 0,109,432,312,69,3Референсные значения70–1105–201,1–1,520–10080–1209–133–7  Известно, что ПНЖК являются начальным субстратом для окислительных процессов. Так, в опыте 1 содержание суммы ДГК и ЭПК у муксуна составляло на экспериментальных кормах 2,2 г в 100 г рыбы (см. табл. 4), в то время как в опыте 2 оно колебалось в пределах 0,2–0,8 г (табл. 7).  Таблица 7Table 7Содержание жирных кислот в липидах мышц двухлеток муксуна, опыт 2The content of fatty acids in the lipids of the muscles of two-year-old muksun, experiment 2ПоказательКорм№ 3№ 4№ 5№ 6РойялЖирные кислоты, % от суммы18 : 1n917,612,514,913,740,318 : 2n64,18,51,21,76,820 : 4n6––0,2––18 : 3n32,12,52,01,11,120 : 5n30,70,50,60,42,722 : 6n31,14,35,71,30,5∑ n612,719,210,811,79,3∑ ω318,915,217,816,112,0n3 / n61,50,81,61,41,3ДГК + ЭПК, %1,84,86,31,73,2Жирные кислоты, г/100 г мышцДГК + ЭПК0,200,540,820,220,40  Замена рыбьего жира на растительные масла привела к увеличению содержания ПНЖК, ДГК и ЭПК при снижении моноеновой олеиновой кислоты (18 : 1n9), по сравнению с рыбами в контрольном варианте и получавшими финский корм. Включение соевого и рапсового масел вместо рыбьего жира не снизило показателей роста и выживаемости муксуна и положительно отразилось на жирнокислотном составе. Использование в качестве заменителя рыбьего жира куриного желтка не отразилось на жирнокислотном составе липидов рыб.Замена рыбьего жира на льняное, рыжиковое масла и желток куриного яйца в составе кормов для двухлеток муксуна (опыт 3). В составе кормов № 7–10 рыбий жир заменяли на разное количество льняного масла. В корме № 11 впервые использовали в качестве заменителя рыбьего жира рыжиковое масло.На корме № 7, содержащем наибольшее количество рыбьего жира (15 %), отмечена очень высокая смертность рыб, что привело к разреженной плотности рыб и повышенной в связи с этим скорости роста оставшегося муксуна, но вызвало резкое снижение (более чем в 2 раза) общей биомассы рыбы (табл. 8), уменьшение содержания витамина С в филе (табл. 9), ухудшение жирнокислотного состава липидов (табл. 10) за счет снижения ДГК, ЭПК и существенное увеличение олеиновой кислоты (18 : 1n9).  Таблица 8Table 8Выращивание муксуна на кормах с заменой рыбьего жира на другие источники липидов, опыт 3Cultivation of muksun on feed with the replacement of fish oil with other lipids sources, experiment 3КормЛипиды корма, %Рыбоводно-биологические показателиИндивидуальная масса рыбы, г Выживаемость рыб,%Общаябиомасса, кгСуточныйприрост рыбы, %Кормовойкоэффициент№ 7Рыбий жир – 15Льняное масло – 5191,2 ± 6,5226,31,191,1№ 8Рыбий жир – 10Льняное масло – 7Желток – 5162,4 ± 8,86215,11,081,3№ 9Рыбий жир – 10Льняное масло – 10158,5 ± 7,97116,91,071,3№ 10Рыбий жир – 5Льняное масло – 15177,0 ± 8,15514,51,141,2№ 11Рыбий жир – 10Рыжиковое масло – 10159,9 ± 7,96515,71,071,3БНБКНет данных166,4 ± 6,97017,51,101,2Таблица 9Table 9Физиологические показатели двухлеток сиговых, опыт 3 Physiological parameters of two-year-old whitefish, experiment 3КормГемоглобин, г/лЭритроциты, млн/мклИндекс печени, %Витамин С, мкг/гЖир,%в мышцахв печенив мышцахв печени№ 775,2 ± 2,61,0 ± 1,31,5 ± 0,0519,397,75,26,7№ 874,4 ± 3,90,76 ± 0,041,5 ± 0,0824,596,56,310,7№ 975,0 ± 3,40,87 ± 0,061,3 ± 0,0722,599,35,39,7№ 1079,4 ± 2,60,70 ± 0,031,5 ± 0,0423,792,15,411,8№ 1179,6 ± 1,70,75 ± 0,041,6 ± 0,0625,393,65,89,1БНБК62,8 ± 5,50,82 ± 0,081,7 ± 0,0623,1107,55,69,8Референсные значения70–110–1,1–1,520–10080–120–3–7 Таблица 10Тable 10Содержание жирных кислот в липидах филе двухлеток муксуна, опыт 3The content of fatty acids in lipids of fillets of two-year-old muksun, experiment 3ПоказательКорм№ 7 № 8 № 9 № 10 № 11 БНБКЖирные кислоты, % от суммы18 : 1n941,3625,7124,8721,6927,8939,3518 : 2n614,724,458,977,6213,119,020 : 4n60,682,251,140,600,770,3618 : 3n36,614,483,383,217,822,8420 : 5n31,014,703,094,582,372,4122 : 6n31,425,213,7718,9511,173,45∑ n615,4013,4614,8711,9217,7411,62∑ ω39,0417,2421,2627,1423,09,89n3 / n60,591,281,432,281,30,85ДГК + ЭПК, %2,439,916,8623,5313,545,86Жирные кислоты, г/100 г мышцДГК + ЭПК0,130,620,891,270,780,33   Мононенасыщенная олеиновая кислота обычно образуется в организме из насыщенных кислот для сохранения проницаемости мембран, компенсируя потерю длинноцепочечных ПНЖК [19]. Замена рыбьего жира на льняное и рыжиковое масло положительно отразилась на выживаемости, общей биомассе, содержании витамина С в мышцах и на жирнокислотном составе (см. табл. 8–10), особенно на количестве омега-3 кислот. Так, при включении льняного масла вместо рыбьего жира в количестве 5, 7, 10 и 15 % содержание омега-3 кислот в мышцах муксуна составило 9, 17, 23 и 27 % соответственно, в том числе ДГК – 1,4; 5,2; 13,8 и 18,9 %, при этом пропорционально выросло и количество длинноцепочечных ПНЖК в 100 г рыбной продукции, а содержание олеиновой кислоты снизилось до 41,4; 25,7; 24,9 и 21,7 % соответственно.Следует отметить, что обычно при замене рыбьего жира на различные растительные масла количество ДГК и ЭПК в мышцах рыб снижается [1, 4, 8, 20–22], но при использовании льняного масла, содержащего наибольшее количество материнской АЛК, которую многие рыбы способны преобразовывать в длинноцепочечные формы, это уменьшение часто менее значительно, чем при замене рыбьего жира на другие масла. Полученные нами неожиданные результаты – увеличение ДГК в опыте 2 при замене рыбьего жира на соевое и рапсовое масла, а также увеличение ПНЖК омега-3 при замене на льняное и рыжиковое масла в опыте 3 объясняются, по всей вероятности, тем, что в составе экспериментальных кормов использовался не соответствующий техническим требованиям рыбий жир, характеризующийся низким содержанием омега-3 кислот, а возможно, и окисленностью липидов кормов и тканей рыб при аномально высокой температуре, которая усиливает прогоркание липидов [18]. Снижение рыбьего жира и замена его на льняное и рыжиковое масла нормализовало в основном общее состояние рыб и стимулировало образование у рыб из материнской АЛК, которой много в рыжиковоми особенно в льняном масле, необходимого количества ДГК и ЭПК. Известно, что увеличение содержания АЛК может вызывать рост продукции ДГК и ЭПК [8].  ЗаключениеПо результатам проведенных исследований установлено, что замена рыбьего жира на растительные масла, содержащие альфа-линоленовую кислоту, не снижают интенсивности роста и выживаемости рыб и что сиговые рыбы обладают необходимым количеством ферментов десатураз и элонгаз для преобразования альфа-линоленовой кислоты в длинноцепочечные ПНЖК. Лучшие результаты по выживаемости рыб, общей биомассе при нормализации жирнокислотного состава липидов получены при замене половины рыбьего жира на льняное масло (10 из 20 %). Замена такого же количества рыбьего жира на рыжиковое масло тоже положительно отразилось на жирнокислотном составе, но в меньшей степени, чем при замене на льняное масло.Включение желтка в состав корма № 8 (опыт 3) привело к повышению содержания арахидоновой кислоты (20 : 4n6) до 2,25 % в филе рыб. Этот результат требует проверки, т. к. в опыте 2 (желтокв корме № 8) не изменил содержания арахидоновой кислоты в мышцах муксуна. Таким образом, представленные результаты экспериментов свидетельствуют о возможности замены 50 % рыбьего жира на льняное масло в составе продукционных кормов для сиговых рыб, но для получения стабильных эффективных рыбоводно-биологических результатов и ценной в пищевом отношении рыбной продукции необходимо при изготовлении кормов обращать самое пристальное внимание на качество используемых компонентов и особенно таких важных источников ПНЖК, как рыбий жир.