Введение Технологии, используемые в настоящее время при выращивании сельскохозяйственных животных, в том числе и рыб, как правило, сопровождаются стрессовыми ситуациями, которые, в свою очередь, индуцируют процессы свободно-радикального окисления (СРО). Выращивание объектов аквакультуры, и в частности осетровых, в условиях рыбоводных хозяйств и использование при этом легкоокисляемых высокожирных кормов также индуцирует в организме рыб процессы СРО и нарушения обмена веществ, следствием чего являются недостаточный прирост и задержка развития рыб [1]. Одним из направлений усовершенствования биотехники разведения животных, в том числе и рыб, является использование средств адаптогенного действия. Особое внимание в настоящее время уделяется средствам антиоксидантного действия, в частности витаминам и микроэлементам. Исключительно важную роль в инактивировании процесса окисления полиненасыщенных жирных кислот и стабилизации клеточных мембран играют витамин Е (α-токоферол) и микроэлемент селен (Se) [2–5]. Исследований по применению селена в комплексе с витаминами для кормления сельскохозяйственных животных достаточно много. Однако при выращивании рыб, и особенно осетровых, результатов применения этого витаминно-минерального комплекса недостаточно, т. к. они не дают целостной картины получаемого эффекта [6]. Помимо микроэлементов и витаминов для восстановления нормального физиологического состояния животных широко используются различные пробиотические препараты, которые укрепляют естественный иммунитет за счёт активизации роста полезных микроорганизмов, вытесняя из состава кишечного микробиоценоза патогенные формы [7]. Цель исследований – изучить влияние препарата Е-селен при его взаимодействии с новым пробиотиком Бацелл на динамику рыбоводно-биологических показателей и физиологическое состояние молоди гибрида стерлядь × белуга (Acipenser ruthenus × Acipenser huso Linnaeus) в условиях замкнутого водоснабжения (УЗВ). Для достижения цели необходимо было изучить влияние пробиотика Бацелл и комплексного препарата Бацелл + Е-селен на рост, развитие и физиологическое состояние сеголеток гибрида стерлядь × белуга (Acipenser ruthenus × Acipenser huso Linnaeus). Материалы и методы исследований Исследования были выполнены в 2013 г. в лаборатории водных биоресурсов и аквакультуры на базе экспериментального аквариального комплекса «Кагальник» Южного научного центра Российской академии наук. В качестве объекта исследований использовали сеголеток гибрида стерлядь × белуга (Acipenser ruthenus × Acipenser huso Linnaeus). Выращивание рыбы проводили в бассейнах размерами 1,0 × 1,0 × 0,5 м при контролируемых гидрохимических и гидрологических условиях: температурный режим поддерживался на уровне 17–19 ºС, кислородный режим изменялся в пределах 6–7 мг/л, значения рН – 6–7 ед. В качестве биопрепаратов при кормлении добавляли пробиотик Бацелл, а также витаминно-минеральный комплекс E-селен + пробиотик Бацелл. Рыб кормили сухим гранулированным кормом Efico Sigma840 № 3–4 (BioМar) по стандартным нормам с корректировками по поедаемости. Нормы ввода пробиотика и витаминно-минерального комплекса в корм определяли на основании литературных данных и доз, принятых в сельском хозяйстве. Исследование проводили по следующей схеме: 1. Контроль – кормление сухим гранулированным кормом BioMar № 3–4. 2. Опыт № 1 – добавление в рацион пробиотика Бацелл в составе спорообразующих бактерий Bacillus subtilis 945(B-5225); ацидофильных бактерий Lactobacillus acidophilus L917 (B-4625); Ruminococcus albus 37(B-4292) (0,2 % от массы сухого корма). 3. Опыт № 2 – добавление в рацион пробиотика Бацелл (0,2 % от массы сухого корма) и витаминно-минерального комплекса E-селен (300 мкг селена/кг корма). Ранее было установлено, что применение комплекса Е-селен в дозе 300 мкг/кг корма способствовало незначительному увеличению показателей роста молоди гибридных форм осетровых [8]. Изменение весовых характеристик контролировали с помощью аналитических весов Ohaus Pioneer. Состояние исследуемых рыб и эффективность выращивания оценивали на основании данных весового роста, выживаемости, коэффициента массонакопления [9]. Взвешивание и измерение рыбы проводили согласно разработанным рекомендациям [10]. Физиологическое состояние рыб оценивали по содержанию гемоглобина [11, 12], СОЭ, уровню холестерина [13, 14] и общих сывороточных липидов [15–17], концентрации общего сывороточного белка [18]. Для гематологических исследований кровь у рыб брали прижизненно из хвостовой вены. Результаты исследований обработаны с применением общепринятых методов биологической статистики [19] и программы Microsoft Exel. Уровень различий оценивали с помощью критерия достоверности Стьюдента. Результаты исследований и их обсуждение В результате исследований было выявлено, что абсолютный прирост рыб, выращенных в оптимальных условиях среды с добавление в рацион пробиотика Бацелл и комплекса Бацелл + Е-селен, выше, чем в контрольном варианте в 6,8 и 3,7 раза соответственно. В варианте, где применяли комплекс добавок, прирост был несколько ниже, чем у рыб, в корм которым добавляли чистый пробиотик – на 26,2 %. Аналогичная динамика свойственна и другим массовым характеристикам (рис. 1). Рис. 1. Показатели роста стербела при введение в рацион пробиотика Бацелл и препарата Е-селен Таким образом, в оптимальных условиях среды наибольшую прибавку по массе дал пробиотик Бацелл. Снижение абсолютного прироста массы в опыте, где применялся комплекс Бацелл + + Е-селен, можно объяснить образованием нерастворимых форм при его вступлении в контакт с микрофлорой кишечника и выводом части пробиотика вместе с кормом из организма рыб [20]. Кроме изучения рыбоводно-биологических параметров у экспериментальных рыб, исследовали динамику гематологических показателей. Исследование красной крови (рис. 2) показало, что значения СОЭ были ниже установленной нормы, характерной для осетровых в естественной среде (2–4 мм/ч), во всех вариантах эксперимента (0,5–2,0 мм/ч). Это связано со спецификой выращивания и кормления рыб в УЗВ и обусловлено изменением соотношения альбуминов и глобулинов в крови экспериментальных рыб. Однако в процессе эксперимента наблюдалось достоверное увеличение значений СОЭ. Биологически активные добавки, и в первую очередь пробиотик, повлияли на положительную динамику значений СОЭ в крови рыб. Е-селен, содержащийся в составе комплексного препарата, оказался менее эффективным. Динамика значений гемоглобина в крови опытных рыб находилась в пределах нормы (50–80 г/л), характерной для рыб из естественных водоемов. Более существенное увеличение уровня гемоглобина от исходного уровня выявлено у рыб, которым добавляли в рацион комплекс Бацелл + Е-селен. Положительное влияние на динамику этого физиологического показателя оказал Е-селен. Концентрация сывороточного белка в крови гибрида стерлядь × белуга в начале эксперимента была ниже нормы (23,0–25,0 г/л) и достоверно не отличалась во всех опытных вариантах и контроле. При добавлении в корм комплексного препарата Бацелл + Е-селен наблюдалось некоторое увеличение уровня транспорта белка в крови – 28,24 ± 1,71 г/л по сравнению с другими вариантами эксперимента (рис. 3). Рис. 2. Динамика значений СОЭ и гемоглобина при введении в рацион молоди стербела пробиотика Бацелл и 300 мкг/кг Е-селен (n = 10) Рис. 3. Динамика общего сывороточного белка при введении в рацион молоди стербела пробиотика Бацелл и препарата Е-селен (n = 10) Степень влияния биологически активных добавок на физиологическое состояние экспериментальной молоди также характеризуется изменением динамики липидного обмена. Анализ исходного физиологического состояния отдельных групп стербела показал, что оно неоднородно по уровню липидов в крови. Особенно высокий уровень липидов при норме 3,1–5,6 г/л отмечен у рыб в опыте № 2 в исходном состоянии (рис. 4). В процессе эксперимента у рыб, которым добавляли в корм комплекс Бацелл + Е-селен, уровень липидов в крови снизился и стабилизировался в пределах нижней границы нормы. У рыб контрольной группы концентрация липидов в крови увеличилась более чем в 2 раза, а у рыб, где в качестве добавки применялся только пробиотик Бацелл, – в 1,3 раза. Селен положительно повлиял на динамику липидов в крови экспериментальных рыб. Рис. 4. Динамика липидного обмена при введении в рацион молоди стербела пробиотика Бацелл и препарата Е-селен (n = 10) Динамика холестерина во всех вариантах была однонаправленной и соответствовала динамике липидов, однако достоверных различий между исходным уровнем и конечным результатом у конкретной группы рыб не выявлено. Влияние пробиотика и препарата Е-селен на холестериновый обмен никак не проявилось. Заключение Результаты исследований подтвердили, что применение препарата Е-селен в низких концентрациях при кормлении рыб практически не увеличивает значения массовых характеристик. Профилактические дозы применяются в первую очередь с целью стабилизации перекисных процессов и, соответственно, физиологического состояния животного, деформируемого технологическими условиями выращивания. Выращивание стербела в оптимальных условиях среды показало, что наибольшую прибавку по массе дал пробиотик Бацелл. Снижение эффективности действия комплексного препарата Бацелл + Е-селен, возможно, было обусловлено кумулятивным эффектом вступления препарата Е-селен в контакт с микрофлорой кишечника и переходом комплекса в нерастворимые формы с его выводом из организма рыб. Таким образом, при разработке новых биотехнологий выращивания рыб, особенно гибридов, в УЗВ с использованием пробиотических и витаминно-минеральных препаратов необходимо учитывать не только исходное физиологическое состояние объектов аквакультуры, наследственные потенции к росту родительских пар, но и возможность возникновения кумулятивных и антагонистических эффектов при использовании кормов, содержащих в своем составе эти компоненты.